產品介紹:
將待測DNA經過亞硫酸鹽處理,通過PCR擴增過程引入T7啟動子序列,經T7 DNA聚合酶的體外轉錄過程得到各樣本RNA產物,經堿基特異性酶切處理,得到RNA小片段,并用飛行質譜檢測每個片段的分子量,EpiTYPER程序完成數據的自動化處理并報告每個檢測片段的甲基化程度。
技術優勢
· 檢測片段長:擴增片段長度可達500bp
· 高靈敏度:可發現低至5%甲基化水平,樣本起始量低至10 ng。
· 重復性好:變異系數CV≤5%。
· 高性價比:用384孔板進行PCR反應,一個擴增產物可以進行多重CpG位點分析,無需后續驗證,可直接用于文章發表。
服務內容
1. 根據客戶提供的序列信息進行預評估;
2. 進行樣本DNA的分離、純化、質檢及亞硫酸鹽修飾。
3. 使用特殊設計的一對引物擴增樣本,得到帶有T7 RNA聚合酶啟動子序列的擴增產物。
4. 在體外轉錄體系中,利用T7 RNA聚合酶,將擴增產物轉錄為RNA片斷。
5. 利用RNase A能夠特異性識別并切割RNA中U 3’端的特性,將RNA片斷切割成攜帶有CpG位點的小片斷。
6. 使用sequenom?MassArray飛行質譜分析系統檢測產物。由于同一片斷中,只有CpG和CpA之間16Da的分子量差別,即質譜圖中兩者峰的差距。