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sequenom甲基化檢測

sequenom甲基化檢測

  • 所屬分類:分子及免疫實驗服務
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  • 發布時間:2022-02-15 14:53:41
  • 產品概述

產品介紹:

將待測DNA經過亞硫酸鹽處理,通過PCR擴增過程引入T7啟動子序列,經T7 DNA聚合酶的體外轉錄過程得到各樣本RNA產物,經堿基特異性酶切處理,得到RNA小片段,并用飛行質譜檢測每個片段的分子量,EpiTYPER程序完成數據的自動化處理并報告每個檢測片段的甲基化程度。

技術優勢

·   檢測片段長:擴增片段長度可達500bp

·   高靈敏度:可發現低至5%甲基化水平,樣本起始量低至10 ng。

·   重復性好:變異系數CV≤5%。

·   高性價比:用384孔板進行PCR反應,一個擴增產物可以進行多重CpG位點分析,無需后續驗證,可直接用于文章發表。

服務內容

1. 根據客戶提供的序列信息進行預評估;

2. 進行樣本DNA的分離、純化、質檢及亞硫酸鹽修飾。

3. 使用特殊設計的一對引物擴增樣本,得到帶有T7 RNA聚合酶啟動子序列的擴增產物。

4. 在體外轉錄體系中,利用T7 RNA聚合酶,將擴增產物轉錄為RNA片斷。

5. 利用RNase A能夠特異性識別并切割RNA中U 3’端的特性,將RNA片斷切割成攜帶有CpG位點的小片斷。

6. 使用sequenom?MassArray飛行質譜分析系統檢測產物。由于同一片斷中,只有CpG和CpA之間16Da的分子量差別,即質譜圖中兩者峰的差距。


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