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1、報告基因質粒的構建。將目的片段插入到熒光素酶表達的報告基因載體上，如pGL3-basic。
2、轉染細胞。將報告基因質粒和phRL-TK(內參)共轉染細胞，根據需要對細胞進行處理。共轉染時，由于內參具有很強的啟動子，因此報告基因質粒：內參轉染量一般為10:1~50:1。天津組學實驗
Luciferase活性測定：
⑴ 初次使用時，配制LAR II，即Firefly luciferase的底物。將LAR II溶解在LAR II buffer中，并分裝-80℃避光保存。
⑵ 加入1X PLB，室溫裂解細胞15 min。
⑶配制Stop&Glo，即Renilla luciferase的底物，能夠終止LAR II的反應。雙熒光素酶實驗
⑷ 測定熒光值。向40 ul的LAR II中加入10 ul細胞裂解液，吹打混勻后，檢測讀數，即為Firefly luciferase的值。加入40 ul Stop&Glo，再次讀數，即為Renilla luciferase的值。qPCR
⑸ 數據處理。首先計算出每管的Firefly luciferase/Renillaluciferase的比值，再以control組的比值為單位1，即可得到不同處理組的相對luciferase活性，也就是該處理組基因轉錄的調控活性。
